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Nanodrop 2000c超微量分光光度計(jì)

發(fā)布日期:2024-05-30     點(diǎn)擊數(shù):次

一、主要技術(shù)參數(shù):

Nanodrop 2000c可以通過(guò)基座檢測(cè)0.5-2 ul的樣本,,也可以使用傳統(tǒng)的比色皿來(lái)進(jìn)行樣本檢測(cè),。

1)基座模式:光源為氙閃爍燈,波長(zhǎng)范圍:190-840 nm,,波長(zhǎng)準(zhǔn)確性: ±1 nm,;光譜分辨率≤1.8 nm,吸光值范圍:0.02-300(等同于10 mm光程時(shí)),;檢測(cè)極限:2 ng/ul dsDNA,,最大檢測(cè)濃度:15,000 ng/ul(dsDNA)。

2)比色皿模式:光束高度8.5mm,,光程:10,,5,2,,1 mm,;檢測(cè)極限:0.4 ng/ul dsDNA,大檢測(cè)濃度:750 ng/ul(dsDNA),。

二,、主要應(yīng)用:

1、Nucleic Acid檢測(cè)

吸收光譜,、230nm, 260nm, 280nm吸收值(換算成10mm光徑吸收值)、260/280 ratio,、260/230 ratio及核酸濃度檢測(cè),。

2,、UV-Vis檢測(cè)

190-840nm間所有波長(zhǎng)的吸收值及光譜。

3,、A280蛋白質(zhì)定量法

280nm吸收值(換算成10mm光徑吸收值),、260/280 ratio及蛋白質(zhì)濃度。僅適用于純化后的蛋白質(zhì),,須具有已知的質(zhì)量消光系數(shù)(mass extinction coefficient)方可計(jì)算,。

4、BCA,、Bradford及Lowry檢測(cè)

依不同呈色劑提供不同波長(zhǎng)吸收值結(jié)果,,自動(dòng)畫(huà)出標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算R square,待測(cè)蛋白質(zhì)濃度,。

*蛋白質(zhì)檢測(cè)模式目前提供BCA,、Bradford及Lowry三種常見(jiàn)定量呈色劑,因呈色劑隨時(shí)間會(huì)逐漸加深,,使用前請(qǐng)?jiān)旈喸噭┱f(shuō)明書(shū)并制備不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,,在合適時(shí)間內(nèi)完成檢測(cè),以得到良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線,。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線最多可有七個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品,,每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品最多可做五重復(fù)。

*測(cè)蛋白質(zhì)時(shí)樣品體積需使用2ul,,每個(gè)樣品檢測(cè)后需以Kimwipes低塵擦拭紙擦拭15-20回,,以避免呈色劑與蛋白質(zhì)的殘留。

三,、使用流程(Nucleic Acid檢測(cè)為例)

1,、雙擊桌面軟件圖標(biāo)打開(kāi)軟件(圖1)。

2,、選擇檢測(cè)功能,,如Nucleic Acid、Protein A280,、UV-Vis等(圖2),。

3、對(duì)檢測(cè)樣本進(jìn)行命名,,然后選擇對(duì)應(yīng)樣品測(cè)試類型,,可點(diǎn)擊下拉小箭頭選擇測(cè)試類型,包含:DNA,、RNA,、ssDNA、Oligo DNA,、Oligo RNA,。(圖3)

4,、儀器校零,抬起儀器上臂,,加樣品的緩沖液1 ul或2 ul到儀器的下基座上,,如下圖所示(圖4)。

5,、加樣完畢后,,放下儀器上臂:點(diǎn)擊軟件左上角的Blank圖標(biāo)。大約5秒后,,Measure按鍵由灰色變亮后,,才可以抬起上臂,用無(wú)塵紙把上下基座擦拭干凈,,如圖5所示,。若需重新校零,可點(diǎn)擊左上角的Re-Blank圖標(biāo)重復(fù)步驟5,。

6,、擦拭完畢,用移液器吸取與緩沖液等量的樣品并把樣品加到儀器的基座上,,并且點(diǎn)擊Measure按鍵進(jìn)行檢測(cè),。

7、每完成一次樣品檢測(cè)后,,需用無(wú)塵紙清潔上下基座,。樣本全部檢測(cè)完畢后,用移液器吸取蒸餾水約2-5 ul到儀器的下基座上,,放下儀器上臂,,等待幾秒,抬起儀器上臂,,用無(wú)塵紙把上下基座擦拭干凈之后再將儀器上臂放下,,回到初始狀態(tài)。

8,、數(shù)據(jù)保存:點(diǎn)擊Report,,選擇需保存的檢測(cè)數(shù)據(jù),保存為excel格式,,用光盤刻錄數(shù)據(jù),。

注意事項(xiàng):

1、樣本檢測(cè)量參考:核酸水溶液:1 ul,,純蛋白:2 ul,,Bradford,BCA,Lowry或者蛋白Pierce 660nm試驗(yàn):2 ul,,微生物細(xì)胞懸浮液:2uL,。

2、最好使用精確的移液器(0-2 ul)和tip頭來(lái)取樣來(lái)保證取樣的準(zhǔn)確,。如果對(duì)樣本的特征或者移液器精確性不太確認(rèn),最好使用2 ul樣本來(lái)做檢測(cè),。

3,、對(duì)于所有模式檢測(cè)(包括比色皿檢測(cè)),檢測(cè)臂都必須放下,。

4,、同一滴液體只能做一次偵測(cè),欲重復(fù)定量同一樣品,,請(qǐng)擦掉前一滴,,重新取出一滴進(jìn)行檢測(cè)。

5,、數(shù)據(jù)只能用實(shí)驗(yàn)室公用U盤進(jìn)行拷貝,。

6、及時(shí)做好使用記錄登記,。

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